(Citometria e rrjedhës, FCM) është një analizues qelizor që mat intensitetin e fluoreshencës së shënjuesve të qelizave të ngjyrosura. Është një teknologji e teknologjisë së lartë e zhvilluar bazuar në analizën dhe renditjen e qelizave të vetme. Mund të masë dhe klasifikojë shpejt madhësinë, strukturën e brendshme, ADN-në, ARN-në, proteinat, antigjenet dhe vetitë e tjera fizike ose kimike të qelizave, dhe mund të bazohet në mbledhjen e këtyre klasifikimeve.
Citometri i rrjedhës përbëhet kryesisht nga pesë pjesët e mëposhtme:
1 Dhoma e rrjedhjes dhe sistemi i fluidikës
2 Burim drite lazeri dhe sistem formësimi rrezesh
3 Sistemi optik
4 Sistemi elektronik, ruajtjeje, shfaqjeje dhe analize
5 Sistemi i renditjes së qelizave
Midis tyre, ngacmimi me lazer në burimin e dritës lazer dhe sistemin e formimit të rrezes është matja kryesore e sinjaleve të fluoreshencës në citometrinë e rrjedhës. Intensiteti i dritës së ngacmimit dhe koha e ekspozimit lidhen me intensitetin e sinjalit të fluoreshencës. Lazeri është një burim drite koherent që mund të ofrojë ndriçim me gjatësi vale të vetme, intensitet të lartë dhe stabilitet të lartë. Është burimi ideal i dritës së ngacmimit për të përmbushur këto kërkesa.
Midis burimit të lazerit dhe dhomës së rrjedhjes ndodhen dy lente cilindrike. Këto lente fokusojnë një rreze lazeri me një prerje tërthore rrethore të emetuar nga burimi i lazerit në një rreze eliptike me një prerje tërthore më të vogël (22 μm × 66 μm). Energjia e lazerit brenda kësaj rrezeje eliptike shpërndahet sipas një shpërndarjeje normale, duke siguruar intensitet të qëndrueshëm ndriçimi për qelizat që kalojnë nëpër zonën e zbulimit të lazerit. Nga ana tjetër, sistemi optik përbëhet nga grupe të shumta lentesh, vrimash gjilpërash dhe filtrash, të cilat mund të ndahen përafërsisht në dy grupe: në rrjedhën e sipërme dhe në rrjedhën e poshtme të dhomës së rrjedhjes.
Sistemi optik përpara dhomës së rrjedhjes përbëhet nga një lente dhe një vrimë gjilpëre. Funksioni kryesor i lentes dhe i vrimës gjilpëre (zakonisht dy lente dhe një vrimë gjilpëre) është të fokusojë rrezen lazer me një prerje tërthore rrethore të emetuar nga burimi i lazerit në një rreze eliptike me një prerje tërthore më të vogël. Kjo shpërndan energjinë e lazerit sipas një shpërndarjeje normale, duke siguruar intensitet të qëndrueshëm ndriçimi për qelizat në të gjithë zonën e zbulimit të lazerit dhe duke minimizuar ndërhyrjen nga drita e shpërndarë.
Ekzistojnë tre lloje kryesore të filtrave:
1: Filtri me kalim të gjatë (LPF) - lejon të kalojë vetëm drita me gjatësi vale më të larta se një vlerë specifike.
2: Filtri me kalim të shkurtër (SPF) - lejon të kalojë vetëm drita me gjatësi vale nën një vlerë të caktuar.
3: Filtri i kalimit të brezit (BPF) - lejon që drita të kalojë vetëm në një diapazon specifik të gjatësisë së valës.
Kombinime të ndryshme filtrash mund të drejtojnë sinjale fluoreshence në gjatësi vale të ndryshme në tuba individuale fotoshumëzuese (PMT). Për shembull, filtrat për zbulimin e fluoreshencës së gjelbër (FITC) përpara PMT janë LPF550 dhe BPF525. Filtrat e përdorur për të zbuluar fluoreshencën portokalli-të kuqe (PE) përpara PMT janë LPF600 dhe BPF575. Filtrat për zbulimin e fluoreshencës së kuqe (CY5) përpara PMT janë LPF650 dhe BPF675.
Citometria me rrjedhje përdoret kryesisht për klasifikimin e qelizave. Me përparimin e teknologjisë kompjuterike, zhvillimin e imunologjisë dhe shpikjen e teknologjisë së antitrupave monoklonalë, zbatimet e saj në biologji, mjekësi, farmaci dhe fusha të tjera po bëhen gjithnjë e më të përhapura. Këto zbatime përfshijnë analizën e dinamikës qelizore, apoptozën qelizore, tipizimin e qelizave, diagnostikimin e tumoreve, analizën e efikasitetit të barnave, etj.
Koha e postimit: 21 shtator 2023
