(Citometria e rrjedhës, FCM) është një analizues i qelizave që mat intensitetin e fluoreshencës së shënuesve të qelizave të njollosura. Isshtë një teknologji e teknologjisë së lartë e zhvilluar bazuar në analizën dhe renditjen e qelizave të vetme. Mund të matet shpejt dhe të klasifikojë madhësinë, strukturën e brendshme, ADN -në, ARN, proteinat, antigjenet dhe vetitë e tjera fizike ose kimike të qelizave, dhe mund të bazohet në mbledhjen e këtyre klasifikimeve.
Citometri i rrjedhës kryesisht përbëhet nga pesë pjesët e mëposhtme:
1 Sistemi i Dhomës së Rrjetit dhe Fluidikës
2 burimi i dritës lazer dhe sistemi i formës së rrezes
3 Sistemi optik
4 Sistemi elektronik, ruajtja, shfaqja dhe analiza
5 Sistemi i Renditjes së Qelizave
Midis tyre, ngacmimi me lazer në burimin e dritës lazer dhe sistemin e formimit të rrezeve është matja kryesore e sinjaleve të fluoreshencës në citometrinë e rrjedhës. Intensiteti i dritës së ngacmimit dhe koha e ekspozimit kanë të bëjnë me intensitetin e sinjalit të fluoreshencës. Laser është një burim koherent i dritës që mund të sigurojë ndriçim me gjatësi vale, me intensitet të lartë dhe ndriçim të qëndrueshëm të lartë. Shtë burimi ideal i dritës ngacmuese për të përmbushur këto kërkesa.
Ekzistojnë dy lente cilindrike midis burimit lazer dhe dhomës së rrjedhës. Këto lente përqendrojnë një rreze lazer me një seksion kryq rrethor të emetuar nga burimi lazer në një rreze eliptike me një seksion kryq më të vogël (22 μm × 66 μm). Energjia lazer brenda kësaj rreze eliptike shpërndahet sipas një shpërndarjeje normale, duke siguruar intensitet të qëndrueshëm të ndriçimit për qelizat që kalojnë nëpër zonën e zbulimit të lazerit. Nga ana tjetër, sistemi optik përbëhet nga grupe të shumta lente, pinoles dhe filtra, të cilat mund të ndahen afërsisht në dy grupe: në rrjedhën e sipërme dhe në rrjedhën e poshtme të dhomës së rrjedhës.
Sistemi optik përpara dhomës së rrjedhës përbëhet nga një lente dhe vrimë. Funksioni kryesor i lenteve dhe vrimës së pinit (zakonisht dy lente dhe një vrimë) është të përqendroni rrezen lazer me një seksion kryq rrethor të emetuar nga burimi lazer në një rreze eliptike me një seksion kryq më të vogël. Kjo shpërndan energjinë lazer sipas një shpërndarjeje normale, duke siguruar intensitet të qëndrueshëm të ndriçimit për qelizat në të gjithë zonën e zbulimit të lazerit dhe minimizimin e ndërhyrjes nga drita e humbur.
Ekzistojnë tre lloje kryesore të filtrave:
1: Filtri i kalimit të gjatë (LPF) - lejon vetëm dritën me gjatësi vale më të larta se një vlerë specifike për të kaluar.
2: Filter i kalimit të shkurtër (SPF) - lejon vetëm dritën me gjatësi vale nën një vlerë specifike për të kaluar.
3: Filter BandPass (BPF) - lejon vetëm dritën në një interval specifik të gjatësisë së valës.
Kombinime të ndryshme të filtrave mund të drejtojnë sinjalet e fluoreshencës në gjatësi vale të ndryshme në tubat individualë fotomultiplier (PMT). Për shembull, filtrat për zbulimin e fluoreshencës së gjelbër (FITC) përpara PMT janë LPF550 dhe BPF525. Filtrat e përdorur për të zbuluar fluoreshencën e kuqe portokalli (PE) përpara PMT janë LPF600 dhe BPF575. Filtrat për zbulimin e fluoreshencës së kuqe (CY5) përpara PMT janë LPF650 dhe BPF675.
Citometria e rrjedhës përdoret kryesisht për klasifikimin e qelizave. Me përparimin e teknologjisë kompjuterike, zhvillimin e imunologjisë dhe shpikjen e teknologjisë monoklonale të antitrupave, aplikimet e saj në biologji, mjekësi, farmaci dhe fusha të tjera po bëhen gjithnjë e më të përhapura. Këto aplikacione përfshijnë analizën e dinamikës së qelizave, apoptozën e qelizave, shtypjen e qelizave, diagnozën e tumorit, analizën e efikasitetit të ilaçeve, etj.
Koha e Postimit: Shtator-21-2023
